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腺相关病毒基因传递和表达的优势
发布日期:2018-01-19 浏览次数 :

腺相关病毒基因传递和表达的优势

1.宿主范围广:随时可转染的AAV可高效感染分裂和非分裂细胞;

2.多种血清型 :AAV1, AAV2, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8 和AAV9等;

3.安全性高:ITR 序列和 rep/cap 基因分别由独立的质粒表达;未发现AAV对人体致病,rAAV去除了wtAAV基因组的96%,进一步保证了安全性;

4.免疫原性低:AAV2 的基因组仅 4681 个核苷酸,便于用常规的重组 DNA技术进行操作,而且进行动物实验时造成的免疫反应小;

Vigenebio腺相关病毒的优势

1)载体全:不同的启动子(神经特异性启动子Human Synapsin、CamkIIα、GFAP等)和多种报告基因(EGFP、mCherry、RFP和luciferase等)可供客户选择; 

2)  货期短:AAV克隆载体均与我们18,000个预制人类全长cDNA ORF克隆载体MCS区通用,生产周期短; 

3)滴度高:可提供 1012V.G/ml及以上滴度的病毒.,最高可达1014V.G/ml; 

4)服务优:可根据客户的具体需求提供特殊定制服务。


Vigenebio rAAV产品简介

Vigenebio独有的专利技术和创新性的rAAV载体和最完善的AAV 表达系统,可用于体内和体外表达shRNA,human ORF和CRISPR具有稳定可靠、重复性好、纯度高、滴度高的优点。

AAV无辅助病毒系统(AAV Helper-Free System)可以在无辅助病毒的条件下生产出重组人腺相关病毒。这种系统利用已经明确与调节AAV 复制和表达的腺病毒基因产物,并且将这些基因产物通过转染引进宿主细胞。重组腺相关病毒(rAAV)由多个质粒(Cis质粒、辅助质粒、Rep/Cap质粒)组成。生产具感染性的AAV 病毒颗粒所需的腺病毒基因产物(例如:E2A,E4 和VA RNA 基因)大部分由与其他质粒共转染进细胞的pHelper 质粒提供,其余的腺病毒基因产物由稳定表达腺病毒E1 基因的AAV-293T 宿主细胞提供。Rep 和Cap 基因从病毒载体中被转移到辅助质粒pAAV-RC 中,AAV ITRs 仍位于病毒载体中,实际上在辅助质粒的帮助下,仅需两端的ITR 就能将携带的外源片段包装进入腺相关病毒颗粒,Rep 和Cap 基因的转移后空出的位置是允许外源基因插入病毒基因组中的最大限度。Cis质粒、辅助质粒与Rep/Cap质粒之间不具有同源性序列,因此重组AAV在理论上不具有复制的能力。Vigenebio的腺相关病毒载体ITR序列Rep/Cap基因分别由独立的质粒表达,具有高度安全性。图1为rAAV进入细胞和转运的过程。

 


1.rAAV载体

Vigenebio为您提供了多种腺相关病毒载体。包装 AAV 无需辅助腺病毒,非致病性、免疫原性低。AAV 包装系统包括辅助质粒和Rep/Cap 质粒,ITR 序列和rep/cap 基因分别位于独立的质粒,安全性高。多种血清型 (AAV1、AAV2、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9)可供选择。根据不同客户的需要,提供了分别适用于human ORF、shRNA和CRISPR 、TALEN 基因组靶向操作服务的AAV载体。了解更多AAV载体的详细信息,欢迎访问我们的官方网站www.vigenebio.cn












2.rAAV克隆服务

2.1 rAAV Human ORF 克隆服务

        Vigenebio为human ORF克隆设计的pAV-FH AAV载体,具有Amp抗性、CMV启动子,带有Flag-His标签。多克隆位点与Vigenebio的human ORF穿梭克隆相兼容。非常适于哺乳动物ORF的表达。

2.2  rAAV shRNA克隆服务

 

 

 

 

 

 

 

 

Vigenebio为您提供了多种表达shRNA的rAAV,包括U6或H1启动子和作为哺乳动物表达标记的GFP或RFP。同时,也可根据您感兴趣的基因提供shRNA设计服务。


2.3 rAAV载体容量

腺相关病毒载体能够感染分裂和非分裂细胞。毒性和免疫原性低,适合以相对较高的转染效率在非分裂细胞中长期表达和在分裂细胞中短期表达基因。但AAV载体的外源基因容纳量有限,两个ITR之间的空间只有4.9kb,因此可插入的外源基因为3.5kb甚至更小。请参阅本表选择适合您的病毒载体系统。

腺病毒

腺相关病毒

慢病毒

病毒基因组

dsDNA

ssDNA

ssRNA (+)

病毒外壳

具有包膜蛋白

基因组大小

38-39kb

5kb

9kb

感染的细胞类型

分裂和非分裂细胞

分裂和非分裂细胞

分裂和非分裂细胞

整合至宿主基因组

非整合

非整合

整合

外源基因表达

短暂

潜在的持久

长久

包装容量

7.5kb

4.5kb

6kb

免疫反应

非常低

相对病毒滴度

10E11(非纯化)

10E10-11(非浓缩)

10E7(非浓缩)

相对转染效率

100%

70%

70%

外源基因的相对表达量

        

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