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腺病毒感染目的细胞
发布日期:2018-01-10 浏览次数 :

进行腺病毒感染实验时可使用完全培养液(培养目的细胞用)稀释。培养液中的血清、双抗或其他营养因子不会影响腺病毒的感染效率。

以24 孔培养板为例,进行HEK293细胞的感染实验操作步骤如下:

注意事项:实验前请按照不同的MOI 设置不同的感染孔,并根据MOI 和细胞数量计算所需要的病毒量

 

1.   第一天  细胞的准备

在24孔培养板接种若干孔,每个孔内接种3-5×104个HEK 293细胞,铺板时细胞的融合率为50%左右,每孔培养液体积为300μL,进行病毒感染时细胞的融合率约为70%左右。

 

2.  第二天  病毒的准备

根据实验的实际情况和MOI 值,用培养液准确稀释腺病毒原液。

注意事项:可使用PBS缓冲液或无血清培养液稀释病毒原液

 

3.  第二天  感染目的细胞 

在目的细胞和对照细胞中分别加入计算好的病毒液, 混匀后放于二氧化碳培养箱(37 ℃、5% CO2)孵育过夜。

注意事项:

1)感染前细胞的状态好坏对最终的感染效果高低影响很大,请务必保证加入病毒前,细胞处于良好的生长状态。

2)若病毒对目的细胞的感染效率较低,可通过提高MOI  值提高病毒的感染效率,也可在培养液中加入助感染试剂ADV-HR(详见附录1、附录4、附录5来提高病毒的感染效率。

 4. 第二天  更换培养液

病毒感染细胞12小时后,更换培养液。

注意事项:换液具体时间需视细胞状态而定。如果病毒对细胞有明显毒性作用,影响细胞生长状态,最短可于加病毒4小时更换新鲜培养液后继续培养。

 5. 第三天  感染效率检测

感染24小时后,可利用倒置荧光显微镜观察病毒感染目的细胞的效率。如选择的腺病毒载体不带有荧光标记,可以通过Q-PCR(定量PCR)检测目的基因的表达来评估感染效率。

        

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