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AAV -293 细胞的传代与复苏
发布日期:2017-07-04 浏览次数 :

  AAV -293 细胞的传代

  当细胞生长到汇合率达到 80%~90%时需要对细胞进行传代操作,以扩大细胞数 量,维持细胞良好的生长状态。

  1、消化细胞,方法同细胞冻存。

  2、细胞离心结束后,加入完全培养基重悬。

  3、根据具体情况,将细胞分到10cm 培养皿中,每个培养皿补足到10ml 培养 基。

  AAV-293 细胞的复苏 当细胞传代次数过多,细胞状态变差时,或者细胞出现污染事故时,需要丢弃并对最初冻存的细胞进行复苏。

  1、设置温度为37~42℃的水浴。

  2、查看细胞库记录,根据记录从液氮罐中取出冻存的细胞(需戴上棉手套,防 止被冻伤),迅速丢入水浴锅中并快速晃动,尽量在1~2min 内使细胞溶液完全 溶解。

  3、将细胞溶液转移到15ml 离心管中,并在其中加上1ml 新鲜的完全培养基,混 匀后离心,1000 rpm/min,5min。

  4、去掉上清,加入5ml 新鲜的完全培养基,混匀沉淀后,转入6 cm 培养皿。

  5、将培养皿平稳放入37℃、5% CO2 和95%相对湿度的培养箱中培养。

  6、第二天观察细胞存活率。给细胞换一下培养基。以后每天观察细胞生长情 况。

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