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小鼠肺部AAV注射方式——内镜辅助口腔气管插管术
发布日期:2018-01-19 浏览次数 :

AAV感染肺部有多种方法,较为常用的方法鼻内滴注、气管插管、气管内注射等。之前已给大家介绍过鼻内滴注法,想查看的同学请点击鼻内滴注法 ”,本文再给大家介绍第二种肺部注射方法 — 内镜辅助口腔气管插管术,气管内注射后续更新推出。

 1.内镜辅助口腔气管插管术简介 

口腔气管插管术 能够将病毒载体直接灌输入肺中,却没有外科手术的风险,并且避免了上呼吸道的病毒颗粒的损失。由于几乎所有AAV病毒颗粒都会到达肺内,所以要严格控制AAV的使用量。同时,与鼻内滴注法相比,口腔气管插管术需要一些特殊设备,操作起来也稍有难度。

内镜辅助口腔气管插管术

优点

病毒载体直接入肺,避免外壳手术风险;避免病毒颗粒的损失;

缺点

需严格控制AAV颗粒的用量;需一些特殊设备;操作较困难

 2.内镜辅助口腔气管插管术操作步骤 

1、腹腔注射氯胺酮和甲苯噻嗪将小鼠麻醉;            

注意:动物必须处于足够深的麻醉状态以防止运动或对载体的反应而打喷嚏或咳嗽

2、将小鼠以背卧姿势固定在啮齿动物工作台上;

A. 将门牙环置于小鼠上门牙上,并将尼龙搭扣连接到啮齿动物工作台下表面的相应尼龙搭扣上;

B. 小鼠的背部应完全平放在工作台上,胸部不应偏向两侧,并用尼龙扣完全固定;

3、用尖头棉棒把小鼠的舌头卷起;

4、轻轻地把附有耳镜的插管镜插入喉咙深部的气管开口处(大约在耳朵前部),插管镜的凹面应远离舌头;

5、轻轻移动耳镜直到可以看到喉部(有时需稍微旋转镜子,以获得最佳视野);操作时需注意动作幅度要小,如果只能看到舌头背面,则需重新移出从头开始操作;

6、当可以看清喉部时,便可加入一滴2%的利多卡因,在插管前,插管镜可移出(小于30s),在此期间要定位导管针;

7、30秒以后,重复上述3-5的步骤,重新插入插管镜,重新找到可以看清喉部的位置;

8、重新可以看清喉部后,导管针首先进入气管开口,针到位后,插管镜可以移出,然后引导导管缓缓向下,直到导管的中心(粉色部分)接触到小鼠门牙,每只小鼠不要尝试2次以上插入导管;

9、一旦导管到位,要把针移出以便小鼠正常呼吸;

10、确定导管在气管内的正确位置;

11、用0.35mL的注射器通过导管按照3μL/g体重输入AAV;

12、立刻使用1mL无针头注射器输入0.2mL空气,并重复2-3次以减少AAV在导管内的残留;

13、把导管移出;

14、将小鼠轻轻从工作台拿下,并将头部和胸部用折叠的纸巾小幅度垫高,以保证小鼠顺畅的呼吸;

15、对小鼠状态进行监测直到其苏醒,预计在24到36小时之内会恢复轻到中度的呼吸。

        

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