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科学实验力证!维真敲除慢病毒新品出炉!
发布日期:2019-04-09 浏览次数 :


一、实验准备:


① 载体:Lenti-Crispr-2in1 gRNA

② 敲除基因:human AKT1



③ 细胞系:HEK293细胞



④ 序列:


二、实验流程:

 

1.分别构建AKT1基因4条单独sgRNA载体,及两对2in1 sgRNA载体;

2.将4条sgRNA分别转染293细胞以及两对2in1 sgRNA载体共转染293细胞;

3.抗性筛选后,收集细胞;

4.基因组PCR验证sgRNA编辑效率。


三、敲除效果分析:

 

1. 基因敲除效果分析

小结:经测序及ICE软件分析,可见,多条sgRNA的编辑效果优于单条sgRNA编辑效果。


2.  ICE软件分析编辑效率

小结:经测序及ICE软件分析,可见,多条sgRNA的编辑效果优于单条sgRNA编辑效果。


 

四、慢病毒

 

慢病毒 IU(Integration Unit)ml-1

IU ml-1=(C×N×D×1000)/V

C=平均每基因组慢病毒整合拷贝数

N=感染时细胞的数目(约为2.5×10E5)

D=病毒的稀释倍数

V=加入稀释病毒的体积数



 

小结:经qPCR滴度检测,Lenti-Crispr-2in1 sgRNA慢病毒滴度可达1.0X10E8 IU/mL以上;

 


五、维真敲除新品及优势


维真生物现已隆重推出基因敲除新产品,Lenti-Crispr-2in1 sgRNA慢病毒:

第一,保证敲除效率:保证gRNA工作,极大程度上提高敲除效率;

第二,慢病毒滴度高:维真为您提供高滴度的慢病毒,满足体内外实验的需求;

第三,选择性更多:维真可将2对2in1 gRNA分别包装成慢病毒,还可将2对2in1 gRNA包装成一个慢病毒;


科学实验探索,敲除效率更有保证!

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